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Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合 ， 也可以与咪唑结合 。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生 ， 也就是往柱子里倒氯化镍 ， 一个柱长体积就行了 ， 然后平衡柱子 ， 拿你自己的buffer ， 给蛋白提供最适的环境 ， 我一般平衡4个柱长 ， 然后蛋白上样 ， 你可以让他自己挂 ， 这样挂柱子的效果好一些 ， 如果流速太慢 ， 可以加个恒流泵 ， 但是一定不能太快 ， 太快挂柱效果差 ， 当然你也可以选择循环挂柱 ， 就是恒流泵的一头接你装蛋白的烧杯 ， 从柱子中留下来的液体还用同一个烧杯接回去 。挂完之后 ， 按理想来讲 ， 你的蛋白在Ni柱中与Ni就结合了 ， 杂蛋白多数在烧杯里 ， 留下来了 ， 当然肯定有少量杂蛋白也挂上了 ， 这时候你要梯度洗脱 ， 拿咪唑和你的buffer配 ， 一般从0 20mM 40mM 。。。。100mM这样洗脱（当你不知道你的蛋白大概在什么时候出来的时候）我指的是咪唑的终浓度 。咪唑加入之后 ， 会和蛋白争夺与Ni的结合位点 ， 杂蛋白、你的目的蛋白 ， 会在不同的浓度被洗脱下来 ， 洗完之后 ， 你可以用400mM咪唑洗柱子 ， 清理一切蛋白 ， 然后平衡几次 ， 是否选择重生你自己定咯~然后放上20%乙醇保存柱子就可以咯~过的蛋白用不同的管子收下 ， 然后SDS-page检测在哪个管子里 。这是我的经验 ， 楼主可以多方面参考下别人的 。喜欢推荐我的答案哦 ， ~\(≧▽≦)/~
【蛋白过镍柱纯化的过程中 咪唑是哪部用的啊 什么原理啊 谢谢大家！！】
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