茶树ISSR-PCR反应体系的建立

通过优化影响茶树ISSR.PCR的主要参数, 确立了适用于茶树的ISSR反应体系和扩增条件 。 结果表明在20μl反应体系中, 模板DNA、引物、Mg^++、dNTP和TaqDNA聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为10ng、150nmol/L、1.5mmol/L、150gmol/L、0.5U 。 在扩增过程中, 引物的适宜退火温度比其Tm值平均高4.5℃, 扩增出足量产物至少需要30个热循环 。 利用该优化反应体系和扩增条件, 对13份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR扩增, 扩增产物的多态性为77.6% 。 引物TRI18构建的ISSR指纹图谱, 可以区分13份茶树资源中的12份, 分辨率达92.3% 。 【茶树ISSR-PCR反应体系的建立】完成机构:中国农业科学院茶叶研究所, 农业部茶叶化学工程重点实验室, 浙江杭州310008

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