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茶多酚的离体抗氧化作用

茶知识茶叶技术

（□SAYYES提供）
蒋建伟　何文珊　严玉霞　岑颖洲
摘　要　目的和方法：采用分光光度法及电泳法，以离体RBC膜，肝匀浆还原型谷胱甘肽(GSH)水平，质粒DNA损伤程度为检测指标测定茶多酚对离体生物组织的抗氧化作用 。 结果：茶多酚能显著抑制紫外线致人RBC溶血作用(P＜0.01)；能显著抑制60Co γ射线致质粒PUC19DNA单链断裂作用(P＜0.05或P＜0.01)；对VitC/Fe2+激发的肝匀浆GSH耗竭，茶多酚也具有显著的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01) 。 结论：茶多酚具有良好的抗氧化作用，能保护离体RBC，组织GSH，DNA免受氧自由基损伤 。
主题词　茶；溶血；质粒；谷胱甘肽
The antioxidative effect of tea polyphenols in vitro
JIANG Jian-Wei， HE Wen-Shan， YAN Yu-Xia， CEN Yin-Zhou1
Dept. of Biochemistry, Medical College, 1 Dept. of Chemistry,
JinanUniversity, Guangzhou (510632)
Abstract　AIM:To assess the antioxidative effect of tea
polyphenols (TP) on free radical damage. MEHTODS: Used hemolysis,
changes of conformation of plasmid PUC19,
glutathione(GSH) levels of
mice liver homogenates as indexes. RESULTS: TP could reduce
significantly the degree of hemolysis of erythrocyte suspensions
induced by UV (P＜0.01). TP could reduce the degree of single-strain
break of plasmid PUC19 induced by 60Co γ-rays (P＜0.05 or P＜0.01).
TP could inhibit the exhaustion of GSH levels of mice liver
homogenate initiated by Vit C/Fe2+ (P＜0.05 or P＜0.01). CONCLUSION:
TP had a good antioxidative function, it can prevent RBC membrane,
plasmid DNA, tissue GSH suffering from oxygen free radical damage in
vitro.
MeSH　Tea; Hemolysis; Plasmids;Glutathione
近年来研究发现茶叶除了有解渴提神的功效，还有消炎抑菌，降低血压、血糖，抗衰老，抗氧化，抗癌，抗突变等功效［1，2］ 。 茶叶中的主要活性成分是嘌呤类生物碱及多酚类化合物 。 茶多酚(tea polyphenols, TP)是茶叶中分离提纯的多酚类化合物复合体，约占茶干物重的25％,它有30多种酚性物质组成,其中儿茶素类含量最多［1］ 。 研究茶多酚清除生物自由基的作用与机理，对茶叶的药用研究有较大的理论和应用价值 。 目前对活性氧自由基清除作用的研究通常用电子自旋共振法(ESR)进行［3，4］，但实验仪器昂贵，操作也较复杂，一般实验室难以应用 。 本文采用分光光度法及电泳法研究茶多酚对离体RBC膜，DNA，肝组织匀浆的抗氧化作用，来探讨茶多酚的生物学活性 。
材料与方法
一、材料：
茶多酚：广东英德茶厂生产，纯度＞95％ 。 DTNB［5,5"－二硫双-(2-硝基苯甲酸)］，FLUKA公司出品 。 还原型谷胱甘肽(GSH)，上海酵母厂生产，生化试剂 。 PUC19购自华美公司 。 昆明种小鼠，20～22 g，雄性，购自本校动物中心 。 新鲜健康人血，购自本院第一附属医院血库 。
二、方法：
1.照射条件：紫外线(ultravoilet, UV)照射用30 W UV灯进行，样品分装于10 mL烧杯内，置于灯正下方10 cm处，照射25 min 。 质粒PUC19照射采用60Co γ射线照射，样品距源中心线60 cm，高120 cm，照射剂量率为16.67 Gy/min，照射剂量为100 Gy 。
2.溶血试验：人血RBC用生理盐水(NS)洗涤后，作1:90稀释，分组见表1,每组重复6管 。 加样后用30W紫外灯照射25min，然后置4℃ 24 h，离心取上清，用722分光光度计于540 nm测吸光值(A) 。
3.质粒PUC19 DNA断裂试验：取0.67 μg/μL粒2 μL，加入一定量的茶多酚，加入TE缓冲液（pH7.4），使终体积为32 μL，分组见表2 。 60Co γ射线100 Gy照射后，置4℃　8h，用0.8％琼脂糖电泳（电泳缓冲液为0.5×TBE，电泳70V 3h），后用溴乙锭（EB）染色15 min 。 采用凝胶图像扫描系统扫描电泳结果，求出各孔超螺旋、开环型质粒所占的百分率 。 以λ DNA/HindⅢ Markers作为标准分子量对照物，以检测各条电泳带的DNA分子大小及构象 。

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